换一批重组表达HIV不同亚型gp41蛋白的抗原表位暴露情况分析
Evaluation of antigen epitope exposure status of recombinant HIV gp41 protein with different subtypes
摘要目的 通过化学发光法检测原核重组HIV Ⅰ型4种不同亚型gp41膜外区蛋白对阴阳性标本的反应性,间接反映重组表达gp41膜外区蛋白的抗原表位暴露情况,为科研、临床异常标本分析提供分析方法.方法 选取HIV Ⅰ型4个国内主流基因型(BC、AE、B、C)膜外区序列,克隆至pGEX4T-3载体中,优化目标蛋白的纯化工艺,制备出HIV Ⅰ型gp41膜外区相应蛋白作为包被抗原,与商品化gp41-HRP酶结合物配对后,夹心法进行HIV Ⅰ型阴阳性标本反应性的测试,从而判断相应蛋白抗原表位暴露情况.结果 HIV Ⅰ型4个亚型的gp41膜外区相同区段在pGEX4T-3原核载体中均能表达出符合预期大小的目的蛋白;纯化后分别作为包被抗原,按相同浓度包被后进行HIV Ⅰ型阴阳性标本的测试,结果显示不同亚型的gp41表达蛋白与商品化gp41-HRP酶反应性存在较大差异.结论 通过原核表达系统高效表达了HIV Ⅰ型主流亚型gp41膜外区蛋白,化学发光法组建夹心法进行阴阳性标本测试,其反应性不一致,间接反映出不同基因型选取同一表达区域进行体外重组表达其结构折叠方式有区别,此研究为HIV科研、临床标本验证等提供了基础.
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