换一批
换一批大肠埃希菌Mn-SOD基因的克隆、表达及多克隆抗体制备
Cloning and expression of Mn-SOD gene in E.coli and preparation of its polyclonal antibody
摘要目的 实现Mn-SOD基因在大肠埃希菌中的高可溶性表达,制备Mn-SOD的多克隆抗体.方法 用PCR方法从一株野生型大肠埃希菌(E.coli)基因组中扩增Mn-SOD基因编码区,将它克隆到原核表达载体上进行大量表达和纯化,再用纯化的蛋白对新西兰大白兔进行背部多点注射,40 d后取其血清,用Western-blot印迹实验测定抗体效果.结果 SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细菌总蛋白的50%;黄嘌呤氧化酶法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物酶比活为3921.77 U/mg,是对照BL21的276.77倍;并制备了高效价的多克隆抗体.结论 该研究成功地构建了大肠埃希菌Mn-SOD基因高效原核表达系统,所表达的Mn-SOD具有良好的免疫原性和免疫反应性.
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