换一批幽门螺杆菌重组vacA-CtxB蛋白的原核表达及免疫学研究
Prokaryotic expression and immunological study of recombinant vacA-CtxB fusion protein of Helicobacter pylori
摘要目的 原核表达幽门螺杆菌pQE-vctB(含H.pylori细胞空泡毒素毒性片段与霍乱毒素B亚单位的融合基因)在E.coil DH5α中诱导表达,以获得重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性,为制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础.方法 (1) pQE-vctB转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达重组蛋白VCTB,Western blot分析抗原性,镍离子柱纯化.(2)重组蛋白VCTB口服免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgG、小肠冲洗液IgA,以鉴定其免疫原性.结果 重组蛋白VCTB经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为40 kD,亲和层析后可获得纯度为92％以上的蛋白.Western blot分析显示能与VacA抗血清反应.ELISA检测显示,免疫小鼠的血清特异性抗体IgG,肠粘液IgA显著高于VacA对照组(P＜0.01).结论 vacA和ctxB融合基因原核表达质粒转化E.coli DH5α表达菌获得了重组蛋白VCTB,表达量较高,纯度较高,有良好的抗原性和免疫原性,口服免疫小鼠可明显提高其免疫效果,产生较高水平的IgA,可用于制备防治H.pylori感染的口服疫苗.
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关键词
幽门螺杆菌细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位原核表达口服疫苗Helicobacter pyloriVacA cytotoxinCholera toxin B subunit geneProkaryotic expressionOral vaccine
栏目名称
DOI
10.13381/j.cnki.cjm.201511008
发布时间
2015-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
四川省卫生厅项目（120316）
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