换一批
换一批羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位
Expression, polyclonal antibody preparation and subcellular localization of orf 024 gene
摘要目的 克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,()RFV) 024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析.方法 根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增.将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024.将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况.纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析.将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24 h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位.结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59 kDa.Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性.荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达.结论 本实验为后续深入研究()RFV 024基因功能和致病机制奠定了基础.
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