白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制
Effect of interleukin-1β on cyclooxygenase-2 expression and its signal pathways in A549 cells
摘要目的 探讨细胞因子白介素-1β(IL-1β)对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2(COX-2)表达的影响及调节机制.方法 A549细胞培养达80%融合后,用不同浓度的IL-1β(0、0.1、1、5和10 ng/mL)干预或用5 ng/mL IL-1β干预不同时间(0、3、6、9、12和24 h)观察白介素-1β(IL-1β)对A549细胞COX-2表达的影响;用5 ng/mL IL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶(ERK)抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径;用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预,以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响;Western blot检测COX-2蛋白表达,RT-PCR检测COX-2 mRNA表达.COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定.结果 A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加,干预9 h表达达高峰;SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达,PD098059对IL-1 β诱导A549细胞COX-2表达无影响;IL-1β对COX-2报告基因无影响.结论 PKC途径和P38 MAPK途径参与IL-1 β诱导A549细胞COX-2蛋白表达.
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