换一批
换一批人巨细胞病毒UL123基因外显子4诱饵质粒的构建与鉴定
Construction and validation of human cytomegalovirus UL123 gene exon4 bait plasmid
摘要目的 构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子4(ie1-exon4)的诱饵质粒,并评价其用于细菌双杂交系统筛选文库的可行性.方法 以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon4,克隆入pBT质粒,转化E.coli XL1-Blue MRF'Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒,再转化入细菌双杂交系统报告茵株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用.结果 细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon4构建成功,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-C86-491/λC1,且pBT/ie1-exon4无自身激活作用.结论 成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1-exon4,可用于筛选文库.
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