换一批
换一批慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞系建立
Construction of human SH-SY5Y cell line stably transfected with GSK-3β gene silencing expression by lentivirus-mediated RNA interference
摘要目的 构建靶向糖原合成激酶3 β(GSK-3 β)基因的RNA干扰慢病毒载体,建立其对GSK-3 β基因沉默表达的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的细胞系模型.方法 根据GSK-3 β mRNA序列设计合成靶向目的基因的短发夹状RNA(shRNA)序列并构建慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定,将慢病毒重组载体与包装载体共转染293T细胞,获得纯化浓缩病毒液,侵染SH-SY5Y细胞,采用绿色荧光示踪观察细胞的转染情况,设为慢病毒干扰组(实验组)、阴性对照组(Lenti-NC组)、空白对照组(Blank组),利用qRT-PCR和Western blot法检测GSK-3β mRNA和蛋白表达水平.结果 成功构建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重组慢病毒转染人SH-SY5Y细胞,72 h后观察转染效率达90％以上,与对照组比较,靶基因变化结果显示,实验组中GSK-3 βmRNA和蛋白的表达均显著降低(均P＜0.01).结论 有效建立慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞模型,为体外评价研究GSK-3β沉默后药物或行为治疗AD提供试验工具细胞模型.
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