换一批
换一批重组质粒pVAX1-Hsp70/CD80DNA疫苗体内外表达
Expression of pVAX1-Hsp70/CD80 recombinant plasmid vaccine in vitro and in vivo
摘要目的 构建pVAX1-Hsp70/CD80质粒,观察其在体内外的表达,初步评估其有效性和安全性.方法 HindⅢ和XbaⅠ酶切质粒pcDNA3.1-Hsp70/CD80和载体pVAX1,将目的基因Hsp70/CD80定向连接入pVAX1中,鉴定构建的质粒pVAX1-Hsp70/CD8.将pVAX1-Hsp70/CD80质粒转染人胚肾293T细胞,Western blot法检测在转染细胞中Hsp70和CD80蛋白瞬时和稳定表达情况.用100μg pVAX1-Hsp70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,于第7天、15天、30天和180天用RT-PCR方法观察Hsp70和CD80在各组织中表达,Real time PCR检测IFN-γ和IL-4在脾脏中的表达.结果 经酶切和测序鉴定,重组质粒构建成功.转染24、48和72 h后的细胞以及G418筛选的稳定表达细胞株均有Hsp70和CD80的表达.第7天和第15天肌肉、淋巴结、骨髓、脾、肝、肺、肾和胸腺组织均有Hsp70和CD80表达.第30天肌肉、肺和肝有Hsp70表达.第180天均未检测出Hsp70和CD80表达.第7天和第15天IFN-γ有较高水平表达.结论 成功构建了pVAX1-Hsp70/CD80质粒,该重组质粒在一定时间内能高效表达Hsp70和CD80,并能诱导IFN-γ较高表达.
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栏目名称
论著
发布时间
2016-01-23
基金项目
四川省科技厅应用基础研究项目
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