慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化*

Construction of PDF7A gene silencing THP-1 cell lines by lentivirus-mediated RNA interference and expression of ABCA1

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摘要目的：利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A（PDF7A）基因沉默人单核巨噬细胞（THP-1）株，并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达变化。方法PDF7A 以基因为靶点，设计合成3段shRNA片段，与慢病毒载体PmiRzip连接，构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装，感染THP-1细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）进行分析，确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到基因沉默稳转细胞株。qPCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株，将其诱导成为泡沫细胞后鉴定基因的表达。结果转染shRNA1、shRNA2、shRNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为（0.480±0.028）、（0.561±0.016）和（0.377±0.013），故选择shRNA3作为干扰基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出沉默细胞株，qPCR和Western blot检测基因的干扰效率，其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后，Western blot检测显示，ABCA1的表达量增加40%。结论PDF7A成功构建shRNA慢病毒干扰载体，并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株，且ABCA1的表达量增加。