人致病性呼肠孤病毒M3编码蛋白纯化及多克隆抗体制备

Purification of human pathogenic reovirus M3 gene encoded protein and preparation of its polyclonal antibody

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摘要目的：根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因片段质粒，纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3基因质粒Pris His MB- M3，转化至大肠埃希菌（E. coil）BL21（DE3）感受态细胞中，异丙基-β- D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB- M3融合蛋白；将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔，获得NBVs M3多克隆抗体；蛋白免疫印迹检测（Western blot）蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果 SDS- PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示：25℃、IPTG 浓度为0.3 mmol/L，诱导12 h，Pris His MB- M3融合蛋白表达量最高；在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体，Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒（NBVs）M3多克隆抗体，为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。