藏药铁棒锤DNA条形码、指纹图谱及主要成分含量测定研究
DNA Barcoding,Fingerprinting and Main Components Quantification of Tibetan Medicine"Tiebangchui"
摘要目的 对多基原藏药铁棒锤进行DNA条形码分子鉴定,并通过HPLC指纹图谱结合化学模式识别以及主要成分定量对不同基原的铁棒锤进行质量评价.方法 采用DNA条形码对藏药铁棒锤2个基原,即铁棒锤Aconitumpendulum Busch和伏毛铁棒锤Aconitumflavum Hand-Mazz.进行分子鉴定研究.采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱,0.01%冰醋酸(三乙胺调pH 6.5)(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱;检测波长235 nm;流速1.0 mL·min-1;进样量10 μL;柱温30℃进行指纹图谱研究.采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"进行图谱分析,对共有峰进行主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA),并对其主要成分进行含量测定.结果 DNA条形码分子鉴定能够通过ITS2序列中的变异位点、遗传距离以及系统发育邻接树是否聚为一支实现多基原藏药铁棒锤准确鉴定.20批藏药铁棒锤样品指纹图谱中共对比出15个共有峰.通过对照品比对指认了其中3个共有成分,并建立了其含量测定方法.指纹图谱相似度范围为0.853~0.997.PCA得到5个主成分的累积方差贡献率为83.931%;OPLS-DA结果表明藏药铁棒锤按基原可分为2类,并筛选出7个差异标志物.指认出的苯甲酰乌头原碱、乌头碱、3-脱氧乌头碱的质量分数为0.106 8~1.1269、1.898 3~28.483 9、0.276 3~7.259 6 mg·g-1.结论 本研究建立的方法稳定可行,可为藏药铁棒锤基原鉴定以及质量控制提供参考.
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