摘要目的 揭示食管癌组织中溴结构域蛋白 4(BRD4)表达水平,并分析其与谷胱甘肽硫基转移酶P1(GSTP1)分子的联系,探究BRD4 在人食管癌细胞(TE-1 细胞)顺铂敏感性调控中的作用.方法 基于癌症基因组图谱(TCGA)数据利用R语言包解析BRD4 在食管癌及癌旁正常组织中表达情况;基因表法普交互分析(GEPIA2)在线评估食管癌肿瘤组织中BRD4 与化疗药物解毒酶GSTP1 表达的联系;通过小干扰RNA(siRNA)和靶向抑制剂(+)-JQ1(25、50 和 100 nM)分别处理食管癌TE-1 细胞,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)验证食管癌TE-1 细胞中BRD4 及GSTP1 蛋白表达变化;TE-1 细胞(+)-JQ1 预处理(50 nM,24 h)前后及结合顺铂(DDP,5μg/ml,24 h),运用Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2 关联X蛋白(Bax)、淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 切割体(cleaved-caspase-3)表达变化;采用CCK-8 法检测TE-1 细胞经(+)-JQ1(50 nM,24 h)抑制BRD4 作用后DDP敏感性的改变.结果 TCGA数据解析后结果显示,食管癌肿瘤组织中BRD4 的mRNA总体表达水平相较于癌旁正常组织有明显升高[(5.61±0.57)VS(4.80±0.59)],差异有统计意义(P<0.001).进一步通过对比配对肿瘤和癌旁正常组织样本发现,食管癌患者食管癌组织中BRD4表达水平(5.57±0.31)普遍显著高于其癌旁正常组织的(4.77±0.44),差异有统计学意义(P<0.01).GEPIA2 数据库发现,在食管癌化疗药物耐药形成过程中关键解毒结合酶GSTP1 与肿瘤组织中BRD4 表达呈正相关(r=0.26,P=0.00029<0.001).结合靶向siRNA处理Western blot结果显示,siRNA-BRD4 处理后食管癌TE-1 细胞中BRD4 和GSTP1 的表达水平较NC组均有明显升高,而siRNA-GSTP1 后TE-1 细胞中GSTP1 表达下调未对BRD4 蛋白产生明显影响.进一步采取BRD4 靶向抑制剂的梯度浓度处理证实,伴随(+)-JQ1 浓度升高TE-1 细胞中GSTP1 蛋白的表达水平较阴性对照组出现明显下降趋势,而由于(+)-JQ1 主要是通过结合于BRD4 的溴结构域发挥作用,仅在最高浓度处理(100 nM)组食管癌细胞中BRD4 出现表达抑制作用.低浓度的(+)-JQ1(50 nM)处理可引起食管癌TE-1 细胞抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达下调以及凋亡相关蛋白Bax表达上升,但对caspase-3 并无明显影响,而在与DDP联合应用时可见caspase-3 的活化形式cleaved-caspase-3 的相比DDP单独使用组细胞有显著表达上调.Western blot结果表明,(+)-JQ1 预处理抑制BRD4 的功能可以提高DDP对食管癌细胞的杀伤作用.CCK-8 结果显示,食管癌TE-1 细胞经抑制BRD4 蛋白功能[(+)-JQ1,50 nM,24 h]预处理后可显著提高对化疗药物DDP的敏感性,DMSO对照组DDP的半数抑制浓度(IC50)值为(19.43±0.59)μg/ml,而(+)-JQ1 预处理后降至(10.46±0.24)μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05).结论 食管癌中高表达的BRD4 可能通过GSTP1 分子参与DDP敏感性调控.