摘要目的 评价酶原法、低温法去除脐血管内皮细胞的优劣,为研究开发符合生理、无排斥、结构和功能类似自体的血管支架提供理论依据.方法 自愿捐赠的健康、足月顺产、无损伤胎儿新鲜脐动、静脉各60根,每根长10 cm,抗生素液37 ℃灭菌24 h后,分为正常组、酶原组和冷冻组(n=20).分组时每根血管取0.5 cm细菌培养.酶原组加入0.1%Ⅱ型胶原酶后夹闭两端,37 ℃水浴消化5、10、15、20 min,去除内皮细胞;冷冻组置入冷存管中,加入DMEM培养液,逐步冷冻,最后置入液氮中,贮藏24 h以上,37 ℃水浴30～60 s快速复温,无菌生理盐水灌冲血管腔数次,去除残留血管内皮细胞;正常组4 ℃ Kerb's保存液恒温存放.将标本分别行HE、弹力纤维及胶原纤维染色及扫描电镜观察;比较各组血管顺应性差异;采用免疫组织化学染色测定人类白细胞抗原ABC(human leukocyte antigen ABC,HLA-ABC)和HLA-DR,分析抗原表达量的变化.结果 各组标本均无细菌生长.组织学观察:冷冻组,内皮细胞完全去除,脐动脉显示内皮下发达的纵行平滑肌层,脐静脉可见内弹力膜;酶原组,胶原酶作用20 min,血管内皮细胞完全去除,脐动脉露出内层纵行平滑肌细胞,脐静脉显示内皮下层.血管顺应性:冷冻组脐血管顺应性大于正常组,正常组大于酶原组,但组间差异均无统计学意义(P＞0.05);脐静脉的顺应性约为脐动脉的2～3倍.HLA-ABC、HLA-DR免疫组织化学染色:冷冻组、酶原组与正常组比较,脐动、静脉抗原性均明显降低(P＜0.01);冷冻组与酶原组比较,脐动、静脉HLA-ABC、HLA-DR抗原表达量均降低,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 冷冻法及0.1%Ⅱ型胶原酶作用20 min均可完整去除脐血管内皮细胞,低温冷冻法优于酶原法.