摘要目的 椎间盘退行性变的生物学治疗方法是骨科学研究热点,寻找一种有效诱导BMSCs向椎间盘细胞分化的方法成为应用细胞移植治疗椎间盘退变的必要前提.探讨重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag体外转染诱导兔BMSCs向类髓核细胞分化的影响.方法 构建真核表达载体pcDNA3.1IE-SOXgFlag.取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨细胞分化并鉴定;流式细胞仪检测细胞表面标记.将第3代BMSCs随机分为转染组、阴性对照组和空白对照组.转染组转染pcDNA3.1IE-SOX9Flag重组质粒,阴性对照组转染质粒pcDNA3.1,空白对照组不转染任何质粒.将构建好的重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag转染第3代BMSCs,72 h后加入浓度为500 mg/L 的G418筛选7 d后,改为浓度200 mg/L的G418维持筛选压力并培养转染细胞.取各组BMSCs采用RT-PCR检测SOX9和Ⅱ型胶原基因(Col2al)的mRNA表达,Western blot检测SOX9蛋白的表达,免疫组织化学染色观察Ⅱ型胶原的表达.结果 BMSCs成骨诱导7 d后ALP染色呈阳性:CD44表达阳性,CD34和CD45表达阴性.成功构建了真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9Flag.将重组质粒转染兔BMSCs,72 h后转染效率为34.32%±1.75%;转染2周后BMSCs形态改变,呈多角形或椭圆形,细胞体积增大,增殖速度减缓,与椎间盘髓核细胞生长特点十分接近.RT-PCR鉴定发现转染组细胞SOX9mRNA和Col2almRNA表达阳性,对照组均为阴性.Western blot检测发现转染组SOX9基因蛋白表达阳性,对照组未见表达.转染组BMSCs的Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性.结论 SOX9基因真核表达载体成功转染兔BMSCs,被转染的干细胞向类髓核细胞分化,为进一步研究应用BMSCs移植治疗椎间盘退行性变奠定了理论基础.