兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪干细胞的诱导分化作用

INDUCTING DIFFERENTIATION EFFECT OF SCIATIC NERVE EXTRACTS ON RABBIT ADIPOSE-DERIVED STEM CELLS IN VITRO

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摘要目的探讨兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的诱导分化作用.方法取4月龄健康新西兰大白兔(体重2.0～2.5 kg)体外分离、培养ADSCs并传至第3代;用bFGF预诱导后,加入正常坐骨神经匀浆上清液(B组)及损伤3、7、14 d的坐骨神经匀浆上清液(分别为C、D、E组)对其进行诱导,空白对照组(A组)仅加入D-Hank液.观察细胞形态变化,并采用实时荧光定量PCR检测各组细胞神经组织蛋白(S-100)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)及巢蛋白(Nestin)基因表达,免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达.结果 C、D、E组细胞经诱导后逐渐出现雪旺细胞或神经细胞样形态改变,以D组变化最为明显;A、B组细胞形态未见明显改变,仍以梭形为主.S-100免疫细胞化学染色示,C、D、E组染色均为阳性,以D组阳性细胞最多;A、B组细胞无阳性表达.实时荧光定量PCR检测示,S-100基因表达量随损伤时间延长呈上升趋势,C、D组达高峰,之后缓慢下降;C、D组表达量显著高于A、B、E组(P＜0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).NSE基因表达量呈相同趋势,D组达高峰,之后缓慢下降;D、E组表达量显著高于A、B、C组(P＜0.05),D、E组间差异亦有统计学意义(P＜0.05).Nestin基因表达量各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论兔损伤坐骨神经匀浆上清液在体外能够有效诱导ADSCs分化为雪旺细胞和神经细胞,伤后早期(3～7 d)可作为细胞移植的最佳时间.