绿色荧光蛋白转基因小鼠脂肪干细胞治疗后肢缺血的实验研究

Study on the treatment for mouse hindlimb ischemia with green fluorescent protein transgenic mouse adipose-derived stem cells

二维码有效期 120s

摘要目的：观察绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠来源的脂肪干细胞（ADSCs）治疗小鼠后肢缺血的效果及其自身所带荧光标记的有效性。方法取4周龄GFP转基因小鼠的脂肪组织，消化获取GFP来源的脂肪干细胞（GFP-ADSCs），并用流式鉴定其表面的干细胞抗原。建立C57BL/6小鼠左后肢缺血模型并随机分成两组（每组16只）：一组后肢缺血的肌肉组织内注射P3代的GFP-ADSCs 1×106个/100μl，对照组于同样部位注射100μl PBS。1个月后利用苏木素-伊红（HE）、免疫组织化学（IHC）及免疫荧光（IF）染色行CD31染色观察缺血肌肉组织内血管新生情况。结果①从GFP转基因小鼠的脂肪组织中可以获得大量GFP-ADSCs并表达干细胞表面抗原CD90及CD105；②GFP-ADSCs被成功地诱导成脂成骨；③GFP-ADSCs组总残肢恢复率显著高于PBS组（P<0.05）；④1个月后 GFP-ADSCs治疗组缺血的肌肉组织内IHC 染色CD31可见较多的新生血管，其微血管密度数显著高于PBS组（P<0.05）；IF 染色显示GFP-ADSCs治疗组的新生血管表达内皮细胞的特异性标记CD31和GFP，而PBS组则未见GFP绿色荧光表达。结论从GFP转基因小鼠的脂肪组织中可以获取大量的ADSCs，其能够促进小鼠后肢缺血肌肉组织内的血管新生，自带的GFP可以示踪ADSCs在受体内的存活、迁移及分化。