长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究
Proliferation inhibition of LncRNA LINC00641 on cervical cancer cell by miR-181d-5p targeting EIF4 A2
摘要目的 观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用.方法 选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组、转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组、转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5 p inhibitor的miR-181 d-5 p inhibitor组、转染miR-181 d-5 p mimic的miR-181 d-5p mimic组、转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组.采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p、miR-181 d-5p、EIF4A2的靶向关系.选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放、化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织).另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织).采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性.结果 生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5 p、miR-181 d-5p、EIF4A2具有可能的结合位点.与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组、miR-181 d-5p mimic组、si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组、miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高.双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p、miR-181 d-5p、EIF4A2具有靶向关系.挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用.与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641、miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05).Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p、EIF4A2、Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性.结论 LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展.
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