换一批
换一批牛、羊布鲁茵多重PCR方法的建立与应用
Development and Application of Multiplex PCR in Differentiating B.abortus and B.melitensis
摘要根据布鲁菌属特异性基因BCSP31和布鲁菌种间特异性标志IS711插入序列,设计合成了3对引物,以牛种布鲁菌544A、104M和羊种布鲁菌1 6M基因组DNA为模板,通过优化反应条件,建立了可同时检测布鲁菌属、牛种布鲁菌和羊种布鲁菌的多重PCR方法.牛种布鲁菌可扩增出301和114 bp 2条带,羊种布鲁菌可扩增出301和253 bp 2条带,该方法对牛种布鲁菌544A和羊种布鲁菌16M混合DNA模板的最小检出量为100 pg,对大肠杆菌O157;H7、小肠结肠炎耶尔森菌等15种参照菌的核酸扩增结果均为阴性.应用该方法对吉林省某牛场的106份粪便进行检测,虎红平板凝集试验作对照,结果PCR检测9份为阳性,且全为牛种布鲁菌阳性,对应的虎红平板凝集试验也为阳性.结果表明,建立的多重PCR方法具有良好的敏感性和特异性.为布鲁菌病的鉴别诊断提供了一种分子检测工具.
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