羊丝状支原体簇环介导等温扩增检测方法的建立
Detection of Mycoplasma mycoides Cluster by Loop-mediated Isothermal Amplification
摘要本试验利用环介导等温扩增技术(LAMP)建立了羊丝状支原体簇的快速检测方法,该方法以羊丝状支原体簇成员的保守性基因16S rRNA为靶序列,设计了4条特异性引物,在65℃等温条件下,60 min一步完成反应.在反应管中预先添加羟基萘酚蓝(HNB),阳性呈蓝色,阴性呈紫色.丝状支原体簇成员——丝状支原体山羊亚种(Mmc)、丝状支原体丝状亚种LC型(Mmm LC)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)的LAMP检测为阳性;对其他病原菌没有交叉反应.以Mmc的核酸为模板进行灵敏度检测,LAMP的最低检出限为10 pg/μL.结果表明,本试验建立了一种特异、敏感、快速、简便的羊丝状支原体簇的LAMP方法.
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