换一批抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测
Expression and Biological Activity of Single Chain Antibody Against gD Glycoprotein of Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus in Insect Cells
摘要为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VH-VL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒.该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30 ku的单链抗体蛋白.Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白.间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV.本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础.
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关键词
牛传染性鼻气管炎病毒囊膜糖蛋白gD单链抗体杆状病毒表达系统infectious bovine rhinotracheitis virus(IBRV)glycoprotein D(gD)single chain fragment variable (ScFv) antibodybaculovirus expression system
分类号
S852.65+9.1
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.08.036
发布时间
2017-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2016YFD0500900）
现代农业产业技术体系建设项目北京市奶牛创新团队岗位专家项目（bjcystx-ny-3）
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