换一批输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定
Construction and Identification of Recombinant Avian Adeno-associated Virus Oviduct-specific Expressing Human Lysozyme Gene
摘要试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,rAAAV).参照已发表的hLYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增hLYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体pFB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac AIOVLYZ.将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为rAAAV-OVLYZ.电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示rAAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明rAAAV能介导hLYZ在输卵管细胞中的特异表达.结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达hLYZ基因的rAAAV,为hLYZ的大量制备奠定了基础.
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关键词
重组禽腺联病毒(rAAAV)人溶菌酶(hLYZ)杆状病毒表达系统鉴定recombinant avian adeno-associated virus (rAAAV)human lysozyme (hLYZ)baculovirus expression systemidentification
分类号
Q819（生物工程应用）
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.10.007
发布时间
2017-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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