换一批无乳链球菌dnaJ基因缺失株的构建及其致病性研究
Study on Construction of dnaJ Gene Knock-out Mutant of Streptococcus agalactiae and Its Pathogenicity
摘要为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证.参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC 018646)目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因.将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株△dnaJ和互补株C△dnaJ.通过分析△dnaJ和C△dnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响.经PCR鉴定和测序证明,△dnaJ和C△dnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,△dnaJ和C△dnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但△dnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;△dnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LDs0为5.68×104 CFU,约是野生株的241倍.dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据.
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分类号
S852.61+1
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.09.002
发布时间
2019-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31502085）
江苏省自然科学基金（H0201700498）
国家重点实验室开放基金（SKLVEB2018KFKT011）
江苏省"青蓝工程"项目
江苏农牧科技职业学院科研项目（NSF201503）
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