牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测

Preparation and Detection of Monoclonal Antibodies Against Mycobacterium bovis MPB70 Protein

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摘要为了制备牛分枝杆菌的单克隆抗体,本试验利用制备的原核表达的牛分枝杆菌重要抗原蛋白MPB70作为免疫原皮下多点注射免疫BALB/c小鼠.利用细胞融合技术,经过5次亚克隆与筛选,取已免疫好的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG3500的作用下进行细胞融合.筛选得到了2株分泌抗牛分枝杆菌MPB70蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为Anti-B-M PB70:8和Anti-B-M PB70:12.采用间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行亲和常数检测、效价分析及亚类鉴定,通过SDS-PAGE凝胶试验对单克隆抗体进行纯度分析,并检测其浓度,通过Western blotting方法对单克隆抗体的反应特性进行鉴定.结果显示,纯化后的MPB70蛋白分子质量大小为20 ku,浓度为0.5 mg/mL.两株单克隆抗体的亲和常数分别为9.95×109和9.53×108;抗体效价分别为1∶102 400和1∶12 800;抗体亚类分别为IgG2b和IgG1,轻链类型均为κ型;纯度＞90％;浓度分别为3.0和2.2 mg/mL;且具有良好的反应特性.以上研究结果表明,本试验成功制备了抗MPB70蛋白单克隆抗体,可为牛结核病病原和抗体检测技术研究奠定基础.