换一批
换一批含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建
Construction of gE Gene Deletion Strain of Equine Herpesvirus Type 1 Xinjiang Strain Containing EGFP Gene
摘要为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+ EGFP+ polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1 H2-EGFP.将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1 H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价.结果 显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCIDs0/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL.采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础.
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分类号
S852.65+2
栏目名称
基础兽医
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.08.035
发布时间
2020-10-20
基金项目
新疆维吾尔自治区重大科技专项项目
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