换一批延边牛PLIN2基因CDS区克隆、生物信息学分析及其表达规律研究
Cloning,Bioinformatics Analysis and Expression of PLIN2 Gene CDS Region in Yanbian Cattle
摘要本研究旨在克隆延边牛脂肪分化相关蛋白PLI N 2基因完整CDS区,通过生物信息学分析PLI N 2基因CDS区序列和蛋白质基本特性,探讨其在延边牛不同组织及前体脂肪细胞成脂过程中的表达规律.选取18月龄去势的延边牛为研究对象,利用RT-PCR和基因克隆获得延边牛PLI N 2基因,与其他物种进行同源性比对及系统进化树构建,利用生物信息学方法预测PLIN2编码蛋白质的理化性质、潜在磷酸化位点及糖基化位点、二硫键分析、信号肽、亚细胞定位、蛋白高级结构,利用实时荧光定量PCR检测PLI N 2基因在延边牛不同组织中的表达水平.结果显示,延边牛PLI N 2基因CDS长1353 bp,编码450个氨基酸;同源性比对发现延边牛PLI N 2基因与黄牛、水牛、绵羊、山羊、野猪、人、小鼠和野鸡的同源性分别为100％、98.7％、96.7％、97.1％、85.5％、86.3％、47.3％和49.1％;系统进化树表明,延边牛与黄牛、水牛的亲缘关系最近,与野鸡的亲缘关系最远.PLIN2蛋白为不稳定蛋白,具有一定亲水性,存在61个潜在的磷酸化位点、16个O-糖基化潜在位点、12个N-糖基化潜在位点,存在2个二硫键,不存在信号肽,主要分布于细胞核中,细胞质和线粒体中有少量分布.PLIN2蛋白高级结构预测该蛋白是由α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角组成,为混合型蛋白,通过无规则卷曲连接,以α-螺旋为主.实时荧光定量PCR结果显示,PLI N 2基因在延边牛小肠组织中表达量最高,其次为背最长肌和肾脏组织.本研究结果可为进一步研究PLI N 2基因的功能提供借鉴.
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