摘要[目的]探究N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶FTO表达水平对猪肌卫星细胞分化的影响,并比较不同表型猪FTO表达和m6 A甲基化修饰水平.[方法]收集分化第0、2和4天的猪肌卫星细胞,用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测FTO和肌球蛋白重链(MyHC)蛋白表达、肌分化因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG)的mRNA表达水平;利用免疫荧光法检测肌卫星细胞分化标志基因MyHC表达情况;采用Dot blotting检测m6 A甲基化修饰水平.将过表达载体(OE-FTO)、空白对照(NC)和FTO基因干扰载体(siRNA-FTO)、阴性对照(siRNA-NC)分别转染猪肌卫星细胞并诱导分化,检测FTO、肌细胞分化相关基因表达情况以及m6A甲基化修饰水平,利用免疫荧光法检测MyHC表达以及肌管形成情况;利用Western blotting和Dot blotting分别检测大白猪、宁乡猪不同组织中FTO蛋白表达情况以及m6A甲基化修饰水平.[结果]在猪肌卫星细胞诱导分化过程中,与诱导分化第0天相比,第2和4天时FTO、My HC蛋白表达水平极显著升高(P＜0.01),FTO、MyoD和MyoG基因mRNA表达水平显著或极显著升高(P＜0.05;P＜0.01);第4天时m6 A甲基化修饰水平显著下降(P＜0.05).与NC组相比,OE-FTO组FTO蛋白表达量极显著升高(P＜0.01),在诱导分化的第0、1和2天,OE-FTO组FTO和MyHC基因mRNA表达水平均极显著升高(P＜0.01),MyoD基因mRNA表达水平极显著下降(P＜0.01);在诱导分化的第1、2、3和4天,OE-FTO组m6 A甲基化修饰水平显著或极显著下降(P＜0.05;P＜0.01).与siRNA-NC组相比,siRNA-FTO组FTO蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),在诱导分化第0、1、2和3天,siRNA-FTO组FTO、MyHC基因mRNA表达水平极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05),m6A甲基化修饰水平显著或极显著升高(P＜0.05;P＜0.01);在诱导分化第0、2和3天,siRNA-FTO组MyoG基因mRNA表达水平显著降低(P＜0.05).大白猪背最长肌中FTO蛋白表达水平显著高于宁乡猪(P＜0.05),m6A甲基化修饰水平极显著低于宁乡猪(P＜0.01).[结论]FTO表达对猪肌卫星细胞分化过程有显著影响,m6A甲基化修饰水平与猪肌卫星细胞分化程度呈负相关.干扰FTO会抑制猪肌卫星细胞分化,提高m6A甲基化修饰水平;过表达FTO可以促进猪肌卫星细胞分化,降低m6A甲基化修饰水平.本研究结果为进一步探究FTO在肌肉分化中调控机制提供参考.