换一批双峰驼Cyp-A的原核表达及多克隆抗体制备
Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of Cyp-A in Bactrian Camel
摘要[目的]制备双峰驼亲环素A(cyclophylin A,Cyp-A)的多克隆抗体,为揭示双峰驼体内的黏膜免疫反应机理提供依据.[方法]从GenBank数据库中双峰驼Cyp-A基因序列(登录号:XM_010969543.1)上选取编码区,截取不含信号肽的膜外序列进行碱基优化后,与pET-28a(+)载体连接构建重组质粒pET-28a-Cyp-A.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达并对表达条件进行优化,优化诱导条件后通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达情况.纯化重组蛋白并免疫家兔,制备兔抗双峰驼Cyp-A多克隆抗体,分别使用ELISA和Western blotting检测抗体效价及特异性,并采用HE和SABC免疫组化染色法对Cyp-A多克隆抗体进行定位观察.[结果]重组质粒pET-28a-Cyp-A主要以包涵体形式表达,Cyp-A蛋白约为17 ku,最佳诱导条件为0.7 mmol/L IPTG诱导8 h,杂蛋白最佳洗脱液为5 mmol/L咪唑.经ELISA和Western blotting检测,兔抗双峰驼Cyp-A多克隆抗体的效价为1:64 000,能特异性识别重组蛋白Cyp-A.经HE和SABC免疫组化染色观察,Cyp-A多克隆抗体仅能使回肠滤泡相关上皮(FAE)中的M细胞特异性着色.[结论]试验成功制备出效价高、特异性强的兔抗双峰驼Cyp-A多克隆抗体,能特异性识别双峰驼回肠中M细胞.
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关键词
双峰驼亲环素A(Cyp-A)原核表达多克隆抗体定位Bactrian camelcyclophilin A(Cyp-A)prokaryotic expressionpolyclonal antibodylocation
分类号
S824
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.07.029
发布时间
2023-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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