摘要[目的]本研究以猪种布鲁氏菌Toll/白介素-1受体(TIR)结构域蛋白(Brucellas uis TIR domain containing protein,Bs-TDCP)为研究对象,进行基因克隆、生物信息学分析及蛋白互作研究,为后续开发适合动物或人类使用的有效布鲁氏菌疫苗奠定基础.[方法]利用GenBank数据库查找黑腹果蝇髓样分化因子88(Dm-MyD88)和人MyD88(Hs-MyD88)基因序列,设计特异性引物进行基因序列扩增.根据猪种布鲁氏菌测序结果,获得BuTDCP基因序列.通过ExPASy、SWISS-MODEL、TMHMM,SMART等在线工具分析Bs-TDCP蛋白理化性质、二级和三级结构、跨膜及功能结构域,并进一步研究Bs-TDCP蛋白与Toll样受体(TLRs)信号通路的关键胞内配体MyD88分子之间的蛋白串扰.[结果]猪种布鲁氏菌TIR结构域蛋白Bs-TDCP基因的开放阅读框(ORF)大小为828 bp,编码275个氨基酸,其中丙氨酸占12.7％,分子式为C134sH2196N390O424S6,Bs-TDCP蛋白分子质量为35.85 ku,理论等电点为9.37,不稳定指数为50.44,属于不稳定疏水性蛋白,不包含跨膜结构域和信号肽序列(SPS),但其具有典型的TIR结构域,Bs-TDCP蛋白二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,占比分别为 77.45％、8.36％、2.91％和 11.27％.重组蛋白 Bs-TDCP(rBs-TDCP)、重组蛋白 Dm-MyD88(rDm-MyD88)和重组蛋白Hs-MyD88(rHs-MyD88)亲和纯化效果良好.蛋白体外结合试验结果表明,不含His标签的Bs-TDCP(rBs-TDCP△)与 MyD88分子之间存在蛋白互作.[结论]rBs-TDCP△分别与rDm-MyD88、rHs-MyD88配体存在一定程度的蛋白互作,本研究结果为开发供人类使用的新型布鲁氏菌疫苗提供理论参考.