绵羊SMAD4基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究
Cloning,Bioinformatics Analysis and Tissue Expression of SMAD4 Gene in Sheep
摘要[目的]克隆绵羊SMAD同源物4(SMAD4)基因并探究其在绵羊中的生物学功能,为研究SMAD4基因在毛囊生长发育过程中的调控作用提供依据.[方法]以小尾寒羊皮肤组织cDNA为模板,PCR扩增SMAD4基因CDS区并克隆测序,对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测SMAD4基因在小尾寒羊和新吉细毛羊心脏、肝脏、脾脏、肾脏、皮肤和肌肉中的表达量.[结果]试验成功克隆小尾寒羊SMAD4基因CDS区,长1 662 bp,编码553个氨基酸.系统进化树分析显示,绵羊SMAD4基因核苷酸序列与山羊和牦牛的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远.生物信息学分析发现,SMAD4蛋白为不含信号肽的非跨膜蛋白,存在磷酸化和糖基化位点,属于亲水性蛋白,主要存在于细胞核中;SMAD4蛋白二级结构以无规则卷曲为主,与三级结构预测结果一致;蛋白互作分析显示,SMAD4蛋白与SMAD2、SMAD1、TGFBR1、TGFBR2、SMAD3等蛋白存在相互作用.实时荧光定量PCR结果显示,SMAD4基因在绵羊中广泛表达;与新吉细毛羊相比,小尾寒羊心脏、脾脏和皮肤中SMAD4基因表达量均显著上升(P<0.05),而肺脏和肌肉中SMAD4基因表达量均显著下降(P<0.05).[结论]试验成功克隆绵羊SMAD4基因CDS区,该基因在绵羊各组织中均有表达,且在小尾寒羊和新吉细毛羊心脏、脾脏、皮肤、肺脏和肌肉中存在显著差异.试验结果为进一步探究绵羊SMAD4基因调控毛囊发育提供理论依据.
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