努比亚山羊Rheb基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建

Cloning,Bioinformatics Analysis and Eukaryotic Expression Vector Construction of Rheb Gene in Nubian Goats

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摘要[目的]研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础.[方法]试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性.[结果]努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C910 H1456 N23eO279 S6,分子质量为20 359.34 u,原子总数为2 887,理论等电点为5.93.Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域.蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76％、7.07％、22.83％和29.35％.构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P＜0.01).[结论]本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持.