摘要[目的]鉴定猪miR-192与Wnt家族成员7A(Wnt7a)基因之间的靶向关系,为进一步构建miR-192介导的胚胎通讯提供依据.[方法]使用miRNA pull-down鉴定miR-192和Wnt7a基因间的互作关系;利用生物信息学软件RNAhybrid 2.2预测miR-192和Wnt7a基因3'-UTR的结合位点,构建含有miR-192结合位点的Wnt7a基因3'-UTR野生型和突变型基因片段,克隆至双荧光素酶报告基因质粒,通过NotⅠ、XhoⅠ酶切和测序进行鉴定;鉴定成功的质粒分别与miR-192 mimics和mimics NC共转染猪子宫内膜上皮细胞,检测双荧光素酶活性;将miR-192 mimics、mimics NC、miR-192 inhibitor、inhibitor NC分别与构建的Wnt7a基因3'-UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因质粒共转染至猪子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测Wnt7a基因mRNA和蛋白的表达水平.[结果]pull-down结果显示,miR-192 mimics组与其阴性对照组相比,Wnt 7a基因相对表达量极显著升高(P＜0.01),miR-192 input组相对于其阴性对照组极显著降低(P＜0.01);RNAhybrid 2.2软件预测到miR-192种子区与Wnt7a基因3'-UTR存在结合位点(UGACCUA);转染Wnt7a野生型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组相比双荧光素酶活性显著降低(P＜0.05),转染Wnt7a突变型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组之间双荧光素酶活性无显著差异(P＞0.05).实时荧光定量PCR结果表明,miR-192 mimics组Wnt7a基因mRNA相对表达量显著低于其阴性对照组(P＜0.05),miR-192 inhibitor组显著高于其阴性对照组(P＜0.05).Western blotting结果表明,过表达miR-192极显著抑制了 Wnt7a蛋白的表达(P＜0.01),抑制miR-192后Wnt7a蛋白的表达量极显著上升(P＜0.01).[结论]miR-192能够与Wnt7a基因3'-UTR发生靶向作用并抑制其表达.研究结果可为今后深入研究miR-192在妊娠着床过程中的调控机制提供理论依据.