换一批猪表皮生长因子在乳酸乳球菌中的表达及其生物活性研究
Expression and Bioactivity of Porcine Epidermal Growth Factor in Lactococcus lactis
摘要[目的]构建表达猪表皮生长因子(pEGF)的乳酸乳球菌原核表达系统,并探究其对断奶仔猪腹泻的影响.[方法]以pUC57-SP45-LEISSTCDA-pEGF序列为模板,利用PCR扩增获得缺失LEISSTCDA片段的融合产物,将其与酶切pNZ8149表达载体连接后电转至乳酸乳球菌NZ3900,以LacF为筛选标记获得重组菌pEGF-NZ.用nisin诱导重组菌pEGF-NZ表达重组蛋白pEGF,并通过Tricine-SDS-PAGE检测其表达情况.改良实验室及工业发酵条件以提高pEGF表达量.利用猪回肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖试验体外验证表达的pEGF生物活性.通过动物试验验证重组蛋白pEGF对小鼠及断奶仔猪腹泻的影响.[结果]试验成功构建重组菌pEGF-NZ,并分泌表达pEGF蛋白.体外试验结果显示,pEGF蛋白能促进细胞增殖.pEGF-NZ重组菌及其表达的pEGF蛋白能延缓小鼠腹泻发生时间,降低腹泻率,保护小鼠肠绒毛的完整性.与对照组相比,pEGF-NZ重组菌处理后,小鼠结肠中乳酸菌数显著增加(P＜0.05),大肠杆菌数、肠球菌数显著降低(P＜0.05),白细胞介素-1α(IL-1α)、IL-1β含量显著降低(P＜0.05),IL-13含量显著升高(P＜0.05).饲粮中添加pEGF-NZ重组菌后,断奶仔猪腹泻情况明显缓解,平均日增重有升高趋势,但差异不显著(P＞0.05).[结论]pEGF-NZ重组菌及其分泌表达的pEGF能够修复肠道屏障,抑制病原菌黏附,调控肠道菌群,其主要通过下调部分促炎因子、上调抑炎因子表达发挥抑炎效果,从而保护断奶仔猪肠道健康,有效缓解腹泻.
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关键词
乳酸乳球菌pEGF-NZ重组菌猪表皮生长因子(pEGF)Lactococcus lactispEGF-NZ recombinant bacteriaporcine epidermal growth factor(pEGF)
分类号
S855.3
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2024.07.009
发布时间
2024-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省重点研发计划项目（2023DJC145）
知识创新专项-基础研究项目（2022020801010224）
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