单宁酸缓解氟化钠诱导小鼠卵母细胞氧化应激的研究
Tannic Acid Alleviate Oxidative Stress Induced by Sodium Fluoride in Mouse Oocytes
摘要[目的]研究单宁酸(TA)对氟化钠(NaF)诱导小鼠卵母细胞氧化应激损伤的保护作用,从而为开发氟中毒解毒剂提供理论依据.[方法]在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加0(对照)、0.25、0.50、0.75 mmol/L NaF,通过检测卵母细胞第一极体排出率,确定NaF最适作用浓度.以最佳作用浓度NaF处理小鼠卵母细胞后,通过添加不同浓度TA(0、1、10、100 μg/L),确定最佳TA作用浓度.在上述试验基础上设置对照组、毒性组(NaF)和解毒剂组(NaF+TA),利用免疫荧光染色检测小鼠卵母细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;统计各组小鼠卵母细胞受精率、卵裂率和囊胚率,测定丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.[结果]与对照组相比,0.25~0.75 mmol/L NaF组卵母细胞第一极体排出率均极显著降低(P<0.01),后续以0.25 mmol/L NaF作为有效毒性剂量进行试验.小鼠卵母细胞经NaF处理后,与0 μg/L TA组相比,10 μg/L TA组卵母细胞第一极体排出率极显著升高(P<0.01).免疫荧光检测结果显示,与对照组相比,NaF组小鼠卵母细胞ROS水平显著上升(P<0.05),GSH、MMP水平和SOD、GSH-Px活性显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01).与NaF组相比,NaF+TA组小鼠卵母细胞GSH、MMP水平以及SOD和GSH-Px活性显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),ROS水平和MDA含量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01).早期胚胎发育统计结果显示,NaF组小鼠卵母细胞的受精率、卵裂率和囊胚率均极显著低于对照组(P<0.01);NaF+TA组小鼠卵母细胞受精率、卵裂率以及囊胚率均极显著高于NaF组(P<0.01),且与对照组相比无显著差异(P>0.05).[结论]NaF通过提高卵母细胞内ROS和MDA水平诱导小鼠卵母细胞产生氧化应激,并降低细胞MMP水平,影响早期胚胎发育.添加10 μg/L TA可以缓解NaF诱导小鼠引起的氧化应激,提高小鼠卵母细胞成熟质量,从而促进体外受精和胚胎发育潜力.
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