换一批
换一批PS-MPs和DEHP联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞自噬的作用机制研究
PS-MPs and DEHP Combined Induce Autophagy in Mouse Colonic Epithelial Cells via NO/iNOS/NF-κB Pathway
摘要[目的]探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞(MCEC)自噬的作用机制.[方法]依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC50),将MCEC分为5组:对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组,各组 MCEC 分别用培养基及含有 200 μg/L PS-MPs、100 μmol/L DEHP、200 μg/L PS-MPs+100 μmol/L DEHP、200 μg/L PS-MPs+100 μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米(PS-341)的培养基处理24 h后,采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性,通过MDC法检测自噬小体,利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬,以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平.[结果]PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力,且IC50分别为2 315 μg/L和1 477 μmol/L.与对照组相比,PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05),MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强(P＜0.05),MCEC的自噬相关基因(Beclin1、ATG5、LC3-B)的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P＜0.05);PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化.[结论]联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS,使NO含量激增,上调NO/iNOS/NF-κB通路,从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬.
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