摘要[目的]了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征.[方法]对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5'-UTR保守区域,建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法,并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测.选取4份BVDV阳性样品,对BVDV 5'-UTR区域序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对,并基于BVDV 5'-UTR区域进行遗传进化分析.[结果]本研究基于BVDV 5'-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线相关系数(R2)为0.997,标准品浓度为2.69× 10 2～2.69×10 9拷贝/μL时具有良好的线性关系,最小检出限为2.69× 10 2拷贝/μL.重复性试验结果显示,变异系数均＜1.7％,具有良好的重复性和稳定性.采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV阳性率分别为45.00％、36.00％、30.77％和29.00％.BVDV 5'-UTR序列比对结果显示,分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支,核苷酸序列相似性为76.6％～99.7％.[结论]本研究明确了 BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一,为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据,同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据,为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础.