1株羊源伪结核棒状杆菌的分离鉴定及耐药性分析

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of a Strain of Corynebacterium pseudotuberculosis from Goats

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摘要[目的]确定云南宜良地区某养殖场疑似患伪结核病病羊的病原,并探究其耐药性及致病性,为该病的诊断和治疗提供理论依据.[方法]通过患病羊临床症状初步判断病因,无菌采集病料,分离纯化病原菌后对其形态特征、培养特性和生化特性进行鉴定;利用PCR扩增分离株16SrRNA基因序列并进行测序比对分析;通过药敏试验、耐药基因检测和小鼠致病性试验探究分离株的耐药性和致病性.[结果]分离株在血琼脂平板上生长状态良好,菌落呈黄白色、不透明样,在普通营养琼脂和普通营养肉汤内生长不良;革兰染色镜检结果显示,菌体为球杆状或棒状,为革兰阳性菌.生化鉴定结果显示,分离株的葡萄糖、尿素试验呈阳性,乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、西蒙氏枸橼酸盐、硫化氢、靛基质、硝酸盐还原试验、甲基红(MR)试验和VP试验均呈阴性.16S rRNA序列比对结果显示,分离株与NCBI数据库中的伪结核棒状杆菌16S rRNA基因序列相似性＞99％,鉴定其为伪结核棒状杆菌.药敏试验结果显示,分离株对链霉素、庆大霉素、新霉素表现中介,对氨曲南、头孢他啶、多黏菌素表现耐药.耐药基因检测结果显示,该分离株携带耐药基因Sul2、Sul3、blaTEM及6laCTX-M.动物致病性试验结果显示,腹腔、皮下接种4.4×10 8 CFU/mL分离菌后可引起小鼠死亡,死亡率达100％.皮下接种96 h后可见小鼠皮下出现脓肿,脓液中可分离出伪结核棒状杆菌.[结论]本试验成功分离鉴定出1株羊源伪结核棒状杆菌,明确了患病羊病原,该分离株对小鼠致病性较强.研究结果为伪结核棒状杆菌感染羊的诊断、流行病学调查以及治疗提供参考依据.