细粒棘球绦虫MAP Ⅱ生物信息学分析及其在虫体不同阶段表达差异研究
Bioinformatics Analysis of Methionine Aminopeptidase Ⅱ of Echinococcus granulosus and Its Differential Expression in Different Stages of the Worm
摘要[目的]研究甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(methionine aminopeptidase Ⅱ,MAP Ⅱ)的分子特征、反应原性及其在虫体不同发育阶段的表达情况,提供一种对终末宿主具有保护作用的疫苗候选抗原.[方法]对MAP Ⅱ蛋白进行生物信息学分析,包括系统进化树构建、理化性质分析及信号肽、跨膜区、抗原表位、磷酸化和糖基化位点、二级结构、三级结构预测.通过原核系统表达MAP Ⅱ蛋白并验证重组蛋白的抗原性,同时进行虫体不同发育阶段转录水平分析.[结果]细粒棘球绦虫MAP Ⅱ蛋白与终末宿主犬、中间宿主绵羊中MAP Ⅱ蛋白亲缘关系较远.MAP Ⅱ蛋白由453个氨基酸组成,分子质量为51 023.75 u,不稳定系数为36.6,为稳定蛋白;平均疏水性指数为-0.609,亲水性较好.不存在信号肽与跨膜区.MAP Ⅱ蛋白具有良好的B细胞线性表位,共有38个磷酸化位点,1个N-糖基化位点.MAP Ⅱ蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,占比分别为33.55%和51.88%;三级结构预测显示其为单体蛋白,GMQE值为0.85.通过原核系统表达出的MAP Ⅱ重组蛋白能与感染细粒棘球绦虫犬的阳性血清结合,抗原性良好.MAP Ⅱ蛋白在原头蚴阶段和成虫阶段均有表达,且成虫阶段表达量显著高于原头蚴阶段(P<0.05).[结论]MAP Ⅱ蛋白结构稳定,具有优势抗原表位,MAP Ⅱ重组蛋白免疫原性良好,其在细粒棘球绦虫不同发育阶段特别是成虫阶段发挥着重要作用,可作为细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选抗原.
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