换一批鸡传染性法氏囊病病毒直接免疫荧光检测方法的建立及初步应用
Establishment of Direct Immunofluorescence Assay for IBDV and Its Preliminary Application
摘要[目的]利用R-藻红蛋白荧光素(R-PE)标记鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)单克隆抗体,建立快速检测组织和细胞中IBDV的直接免疫荧光方法.[方法]试验取单克隆抗体细胞4C12复苏后,免疫小鼠制备单克隆抗体腹水,用层析柱进行纯化,通过间接免疫荧光法和ELISA方法对其进行鉴定,并测定抗体效价;通过偶联试剂盒对单克隆抗体进行标记,建立直接免疫荧光法并优化反应条件,检测其特异性、敏感性及稳定性.利用建立的方法对感染IBDV的鸡法氏囊和脾脏进行检测.[结果]纯化的4C12单克隆抗体腹水效价为1∶108;用R-PE标记4C12单克隆抗体,成功建立了直接免疫荧光检测方法,确定最佳反应条件为:IBDV感染DT40细胞48 h、4％多聚甲醛和无水乙醇为固定剂进行双重固定、R-PE-4C12株单克隆抗体工作浓度为24 μg/mL、抗体孵育90 min,此条件下荧光效果最佳.建立的直接免疫荧光方法与禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)和减蛋综合症病毒(EDSV)不发生交叉反应,特异性较好;该方法在病毒含量为103鸡胚半数感染量(ELD50)时仍能检测到阳性信号,灵敏性较好;稳定性试验显示,R-PE-4C12在4 ℃保存21 d后,仍能产生稳定的荧光信号.建立的直接免疫荧光方法中R-PE-4C12能与感染组织中IBDV结合产生特异性红色荧光;与间接免疫荧光法相比,两者荧光效果没有明显差异.[结论]本研究建立的直接免疫荧光方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性,可以用于组织和细胞中IBDV的检测,为实验室IBDV检测提供一种快速有效的检测方案.
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关键词
鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)直接免疫荧光法单克隆抗体R-藻红蛋白荧光素Infectious bursal disease virus(IBDV)direct immunofluorescence assaymonoclonal antibodyR-phycoglobin fluorescein
分类号
S852.65+7
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2025.09.033
发布时间
2025-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2022YFD1800304-05）
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