摘要[目的]试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准,系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响,从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率,提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力,为畜牧业中SCNT技术的应用提供科学依据.[方法]采集体外成熟的猪MⅡ期卵母细胞,根据胞质颜色(黑色致密或白色颗粒感)及第一极体形态(完整圆形或碎裂长条形)将卵母细胞分为A、B、C、D4个等级.利用显微镜测量卵母细胞胞质直径,采用phalloidin-FITC染色检测微丝分布与表达,通过BODIPY染色评估脂滴大小与数量,并采用α-tubulin-TRITC染色观察纺锤体形态及异常率.通过电激活进行孤雌激活(PA)培养,计算卵裂率、囊胚率及凋亡率.采用近交系猪胎儿成纤维细胞作为供体,构建SCNT胚胎,评价各等级卵母细胞发育能力.[结果]A级猪卵母细胞占比最高(28.60％),胞质直径(117.57 μm)显著大于C、D级卵母细胞(P＜0.05);微丝表达适中(85.85 A.U.),纺锤体异常率最低(24.56％);PA和SCNT胚胎的囊胚率(52.37％和30.80％)最高,且囊胚细胞数量最多(63.73个),均显著优于D级卵母细胞(P＜0.05).B级猪卵母细胞的胞质直径最大(117.67 μm),显著优于C、D级卵母细胞(P＜0.05);微丝表达和小脂滴占比最高(88.72 A.U.和44.07％),但囊胚凋亡率最低(87.12 A.U.);PA胚胎的卵裂率和囊胚率显著低于A级卵母细胞(P＜0.05).C、D级猪卵母细胞的胞质颜色较浅,脂滴较大,纺锤体异常率较高,PA及SCNT胚胎的囊胚率明显降低.[结论]通过对猪MⅡ期卵母细胞进行形态学分级,结合多种细胞质量指标和发育能力评价,证实胞质颜色致密、第一极体完整的A级卵母细胞具备较高的发育潜力.该形态学质量分级体系为猪卵母细胞的筛选提供了可靠、非侵袭性的评价标准,有助于优化SCNT克隆技术的应用效果,推动猪克隆技术在畜牧生产中的发展.