换一批鸡DDX21蛋白表达、多克隆抗体制备与应用
Expression of Chicken DDX21 Protein and Preparation and Application of Its Polyclonal Antibody
摘要[目的]研究鸡DDX21 RNA解旋酶的结构与功能,探索其是否参与H9N2亚型禽流感病毒(AIV)诱导的天然免疫反应.[方法]本研究扩增并克隆了鸡DDX21基因,通过生物信息学方法分析其基因序列;利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达鸡DDX21重组蛋白;以纯化的重组蛋白为免疫原,制备鸡DDX21多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体的血清效价;应用Western blotting方法检测多克隆抗体与内源性鸡DDX21蛋白的反应情况.[结果]PCR扩增的鸡DDX21基因编码区序列为2 145 bp,编码714个氨基酸;克隆至pMD18-T载体的鸡DDX21基因经测序后的核酸序列与GenBank数据库公布的预测序列(登录号:XM_040675361.2)一致;鸡DDX21与鸟类进化关系较近,氨基酸序列相似性为 68.8%～89.7%,属于禽类分支;鸡DDX21蛋白包含高度保守的DEXDc、HELICc和GUCT结构域,其蛋白三级结构与人DDX21蛋白结构模型相似性为82.71%.纯化后的鸡DDX21重组蛋白大小为101 ku,与预期相符;制备的兔抗鸡DDX21抗体血清效价达到1∶320 000,且该多克隆抗体能识别内源性鸡DDX21蛋白.鸡DDX21蛋白在H9N2亚型AIV感染鸡的多个组织中表达量上调,表明病毒感染增强鸡DDX21蛋白的表达.[结论]本研究成功克隆并分析了鸡DDX21的基因序列,制备的兔抗鸡DDX21多克隆抗体能识别内源性蛋白,为后续深入研究鸡DDX21蛋白调控Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制奠定了基础.
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DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2026.02.041
发布时间
2026-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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