摘要[目的]本研究旨在系统解析布鲁氏菌翻译起始因子3(translation initiation factor 3,IF-3)的生物学特性并制备其多克隆抗体,为阐明IF-3蛋白功能及布鲁氏菌检测技术开发提供试验材料.[方法]通过生物信息学软件分析IF-3蛋白的理化性质、结构特征及进化保守性,参照流产布鲁氏菌(Brucella abortus)infC基因序列(GenBank:AM040264.1)保守区域设计特异性引物,PCR扩增目的基因后,利用同源重组技术将目的基因连接p3×Flag-CMV-7.1表达载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行扩大培养后提取质粒,转染293F细胞进行真核表达,经Flag标签亲和层析纯化蛋白,并通过SDS-PAGE、Western blotting验证蛋白表达及纯化效果;将纯化后蛋白与水佐剂混合乳化免疫BALB/c小鼠,通过Western blotting和间接ELISA检测多克隆抗体的特异性及效价,并评估IF-3蛋白作为布鲁氏菌检测靶标的应用潜力;通过免疫荧光试验分析IF-3蛋白的亚细胞定位并进一步验证所制备多克隆抗体的特异性.[结果]IF-3为稳定亲水性蛋白,无跨膜结构及信号肽,含6个磷酸化修饰位点,且在布鲁氏菌属内高度保守;PCR成功扩增出402 bp目的基因片段,成功构建p3×Flag-CMV-7.1-IF-3重组质粒.SDS-PAGE和Western blotting检测显示,纯化后的重组蛋白分子质量大小约 18.3 ku,且无明显杂带.免疫小鼠后血清经Western blotting验证可特异性识别IF-3蛋白;间接ELISA检测显示,所制备IF-3多克隆抗体的效价达1∶12 800,该多克隆抗体对布鲁氏菌强阳性灭活牛血清反应性较弱.细胞定位分析显示,IF-3蛋白在细胞质、细胞核中均表达,且在细胞核中呈聚集状态.[结论]本研究成功制备了高特异性鼠源IF-3多克隆抗体,其具有良好的反应原性,但作为布鲁氏菌通用检测靶标的应用价值有限.本试验结果为进一步研究IF-3蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能提供了试验依据.