换一批猫杯状病毒VP1蛋白主要抗原表位区的原核表达及其多克隆抗体制备
Prokaryotic Expression of Major Antigenic Epitope Region of Feline Calicivirus VP1 Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibody
摘要[目的]建立猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)衣壳蛋白VP1主要抗原表位区(C～F)的原核表达系统,并制备其特异性多克隆抗体.[方法]通过同源重组技术将FCV VP1蛋白的主要抗原表位区克隆至原核表达载体pCold-TF中,构建重组质粒pCold-TF-FCV-VP1.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白.利用镍柱亲和层析对表达蛋白进行纯化,并通过SDS-PAGE与Western blotting检测蛋白纯度及免疫反应性.采用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用间接ELISA检测多克隆抗体效价,用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测抗体特异性和反应性.[结果]成功构建了pCold-TF-FCV-VP1重组质粒,在16℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导20 h蛋白表达量较高.表达的重组蛋白分子质量为82 ku,并以可溶性形式存在.间接ELISA结果显示,多克隆抗体效价可达1∶256 000,进一步通过Western blotting和IFA试验验证所制备的兔源多克隆抗体,其能特异性识别VP1蛋白,显示出良好的免疫原性与特异性.[结论]本研究成功制备了FCV VP1蛋白主要抗原表位区(C～F)的多克隆抗体,为后续深入探究FCV VP1蛋白的生物学功能,以及开发针对FCV的诊断方法提供了生物材料与理论依据.
更多相关知识
关键词
猫杯状病毒(FCV)VP1蛋白抗原表位区原核表达多克隆抗体Feline calicivirus(FCV)VP1 proteinantigenic epitope regionprokaryotic expressionpolyclonal antibody
分类号
S852.65+1
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2026.04.043
发布时间
2026-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2025YFD1800401）
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
