摘要[目的]表达纯化血清8b型禽腺病毒(Fowl adenoviruses serotype 8b,FAdV-8b)Fiber knob蛋白,并制备其特异性单克隆抗体,为FAdV-8b特异性检测方法的开发提供参考.[方法]本研究将Fiber knob目的基因插入大肠杆菌原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-knob,并通过IPTG诱导表达Fiber knob蛋白.使用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与小鼠骨髓瘤SP/20细胞进行融合,采用间接ELISA方法进行亚克隆筛选.通过ELISA、斑点印迹(Dot blotting)、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定单克隆抗体特异性及反应原性,并对单克隆抗体亚型进行鉴定.[结果]经SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,在约40 ku处观察到特异性条带,与预期结果一致,重组Fiber knob蛋白成功表达.纯化后用于小鼠免疫,通过细胞融合、筛选获得4株稳定分泌抗Fiber knob蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B1、7C1、3D4和10E2.经ELISA、Dot blotting、Western blotting和IFA 鉴定,这4株单克隆抗体仅与Fiber knob蛋白和FAdV-8b HN1472发生特异性反应,而不与FAdV-4 WZ、传染性支气管炎病毒(IBV)、H3N3及H9N2亚型禽流感病毒(AIV)发生交叉反应.亚型分析结果显示,单克隆抗体1B1和7C1的重链为IgG2a类,3D4和10E2的重链为IgG1类,轻链均为Kappa型.[结论]本研究经原核表达系统成功获取了FAdV-8b Fiber knob蛋白,并通过免疫小鼠成功筛选出4株具有优异特异性与良好反应活性的FAdV-8b Fiber knob蛋白单克隆抗体.研究结果为FAdV-8b Fiber knob蛋白的生物学功能研究和FAdV-8b的血清学检测方法提供了参考依据.