2株兔源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与全基因组测序分析
Isolation,Identification and Whole Genome Sequencing Analysis of Two Pasteurella multocida Strains from Rabbits
摘要[目的]确定四川某兔场1例皮下脓肿兔感染病原并了解其主要生物学特征.[方法]无菌采集病死兔皮下脓液样品,通过细菌分离纯化、革兰染色镜检、生化鉴定和PCR扩增鉴定细菌,进一步利用药敏试验、小鼠毒力试验和生长曲线测定等进行病原学检查,并对分离病原菌进行全基因组测序分析.[结果]从病死兔皮下脓肿组织中分离出2株菌落大小不同、革兰染色阴性小杆菌,经鉴定为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida),分别将其命名为PmR20236B和PmR20236S.药敏试验显示,2株分离菌耐药谱一致,均对四环素、氧氟沙星、氟苯尼考、氯霉素、青霉素等12种抗菌药敏感,对磺胺异噁唑和林可霉素表现耐药;分离株PmR20236B对昆明小鼠的半数致死量(LD50)为3.50×104 CFU,95%置信区间(95%CI)为2.26×104~5.42×104 CFU;分离株PmR20236S对昆明小鼠的LD50为4.43×108 CFU,95%CI为1.21×108~1.62×109 CFU.全基因组测序结果显示,分离株PmR20236B基因组全长2 637.791 kb,PmR20236S基因组全长为2 563.701 kb;共线性分析结果显示,2株分离株之间存在29个点突变、2段约37 kb的重复基因片段的插入突变、1个约202 kb的倒位区段以及1个约22.8 kb基因片段的易位.[结论]本研究从1例病兔的局部脓肿感染组织中分离获得2株毒力不同的荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,确定了发病病原,为该病的防治提供了科学参考,并通过全基因组测序分析,证实了同一病例感染的多杀性巴氏杆菌存在菌株多样性,为多杀性巴氏杆菌遗传变异及其机制研究提供了参考.
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