摘要[目的]构建稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)S蛋白的CHO细胞株,为后续开展PDCoV的病原学研究、临床诊断方法建立、疫苗研发及抗体筛选与评价提供可靠的试验材料.[方法]将编码PDCoV S蛋白基因的真核表达质粒 pc DNA3.1(+)-PDCoV-S线性化后转染 ExpiCHO-S细胞,使 PDCoV S 基因整合入 CHO细胞基因组.经2轮遗传霉素(G418)筛选和有限稀释克隆获得单克隆细胞株,采用Dot-blotting进行初筛,并通过RT-PCR和Western blotting对单克隆细胞株进行分子鉴定,以验证目的基因的整合和蛋白表达情况.利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性评价单克隆细胞株的活性和生长速度.采用Ni亲和层析方法对其表达产物进行纯化,用BCA方法测定纯化蛋白的浓度.将扩增后的单克隆细胞株连续传代20代,并每隔5代冻存,使用SDS-PAGE和Western blotting分析多代传代后的蛋白表达稳定性.[结果]成功建立1株能稳定表达PDCoV S蛋白的CHO单克隆细胞株.Western blotting和RT-PCR结果表明,PDCoV S 基因已成功整合至ExpiCHO-S细胞基因组中,且单克隆细胞株表达产物能与 PDCoV 阳性血清发生特异性结合.细胞活性检测结果表明,将 PDCoV S 基因整合入ExpiCHO-S细胞基因组不会影响其细胞活性及生长速度.BCA法测得单克隆细胞株蛋白表达量为0.8 mg/mL.稳定性研究中,该细胞株经20代连续传代后仍能稳定生长,且20代的表达量较0代仅下降8.82%,表明所建细胞株具有良好的遗传和表达稳定性.[结论]成功建立了能稳定表达PDCoV S蛋白的CHO细胞株,并证实其在长期传代过程中仍保持较高的表达稳定性,该细胞株可为PDCoV的诊断试剂开发和疫苗研究提供重要材料.