换一批
换一批日本血吸虫病新型树枝状载体-DNA疫苗的构建及其评价
Construction and evaluation of a novel dendrimer vector-DNA vaccine for schistosomiasis japonica
摘要目的 构建并评价一种新型的日本血吸虫病聚酰胺-胺(PAMAM)型树枝状载体DNA疫苗.方法 采用赖氨酸对4.0 G PAMAM进行表面修饰,合成端基改性产物PAMAM-Lys.用电泳阻滞实验确定质粒DNA与PAMAM-Lys复合的比例,用透射电镜测试复合物微观结构变化,并通过电泳分析复合物的稳定性.同时采用MTT法对PAMAM-Lys进行体外细胞活性评价.分别用纯化质粒pJW4303、pJW4303-SjC23、树枝状载体PAMAM-Lys和复合物PAMAM-Lys/pJW4303SjC23免疫50只小鼠,检测各组小鼠的特异性抗体水平以评价其免疫反应性.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,电荷比在2～4时,PAMAM-Lys与DNA正负电荷完全中和,DNA电泳被完全阻滞,两者能完全结合.透射电镜测试结果表明,树枝状高分子载体与DNA的复合导致DNA结构收缩,粒径减小,分布均匀.树枝状高分子与DNA复合物具有良好的稳定性.噻唑蓝法检测结果表明,改性后的树枝状高分子载体及其DNA复合物作用于293T细胞较未改性树枝状载体产生的细胞毒性低;经PAMAM-Lys/pJW4303-sj23免疫的小鼠产生的特异性抗体水平显著高于注射裸DNA疫苗组(P<0.05).结论 氨基酸修饰的树枝状高分子PAMAM-Lys是DNA转染的优良载体,具有良好的生物相容性,赖氨酸修饰可以显著降低PAMAM树枝状高分子的细胞毒性,并能增强DNA疫苗的免疫反应性.
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