换一批
换一批弓形虫表面抗原SAG2基因的克隆表达纯化及鉴定
Cloning, expression, purification and identification of Toxoplasma gondii SAG2 gene in Escherichia coli
摘要目的 构建弓形虫表面抗原2(SAG2)基因重组质粒并在大肠埃希菌中表达.方法 根据SAG2基因序列设计并合成引物,用PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,构建重组质粒.重组质粒经酶切鉴定并测序后,在大肠埃希菌BL21中诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blotting分析其反应原性.结果 SAG2基因PCR产物大小约为561 bp,与预期相符.重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合.重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的SAG2融合蛋白分子量约为47 ku,该蛋白可被GST标签抗体识别.结论 成功重组了弓形虫SAG2基因,表达蛋白具有反应原性.
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关键词
刚地弓形虫表面抗原2基因克隆融合蛋白蛋白纯化Toxoplasma gondiiSurface antigen 2Gene cloneFusion proteinProtein purification
分类号
R382.5
栏目名称
DOI
10.16250/j.32.1374.2015037
发布时间
2015-06-29
基金项目
山东省自然科学基金项目（2009ZRC03083）；
山东省医药卫生科技计划项目（2011HW049、2014WS0330）
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