恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定

Cloning,expression and identification of gametocyte specific protein Pfgdv1 of Plasmodium falciparum

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摘要目的：克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因（Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene，Pfgdv1），体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因，插入到原核表达载体pET28a（+），构建pET28a?Pfgdv1重组表达质粒，转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3+），通过异丙基?β?D?硫代吡喃半乳糖苷诱导表达重组蛋白，经Ni+?亲和层析柱纯化重组蛋白，纯化产物经十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS?PAGE）和 Western blotting 鉴定。结果 PCR 扩增的 Pfgdv1基因长度约为1.65 kb，重组 pET28a?Pfgdv1质粒构建成功，插入方向正确无框移，转化至E. coli BL21（DE3+）所表达的重组蛋白分子量约为67 kDa，且能被抗His标签单克隆抗体识别。结论成功克隆了Pfgdv1基因，表达并纯化了重组Pfgdv1蛋白，为进一步研究恶性疟原虫配子体期传播阻断疫苗奠定了基础。