细粒棘球绦虫H3蛋白的克隆表达及囊型包虫病检测效果评价

Cloning,expression and serological evaluation of H3 protein from Echino-coccus granulosus

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摘要目的：克隆、表达细粒棘球绦虫基底膜特异性硫酸乙酰肝素聚糖核心蛋白（H3），并评价其检测囊型包虫病的效果。方法将从细粒棘球绦虫原头节cDNA文库中免疫筛选的H3基因，克隆入pGEX?4T表达载体，将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞，用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，用亲和层析法纯化重组蛋白，用ELISA方法检测囊型包虫病患者血清、其他寄生虫病患者血清及健康人血清，评价其检测效能，并与本课题组制备的细粒棘球蚴包囊液粗抗原（Hydatid cyst fluid，HCF）和重组AgB8/2进行比较。结果成功构建细粒棘球蚴pGEX?4T?H3重组质粒，并在原核细胞中成功表达。重组H3抗原、纯化HCF和rAgB8/2检测囊型包虫病患者血清的敏感度分别为84.0%（68/81）、90.1%（73/81）、77.8%（63/81），3者差异无统计学意义（χ2=4.58，P>0.05）。重组H3抗原与泡型包虫病患者、囊虫病患者及血吸虫病患者血清分别存在63.3%（19/30）、16.7%（5/30）和5.0%（1/20）的交叉反应，与50份健康者血清无交叉反应；H3检测总特异度为80.8%（105/130），H3、纯化HCF[71.5%（93/130）]和rAgB8/2[82.3%（107/130）]特异度间差异无统计学意义（χ2=5.71，P>0.05）。结论重组H3抗原在囊型包虫病诊断上具有潜在的应用价值。