摘要目的 观察cwlE和sigK双突变苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subspecies israelensis,Bti)生理特性及其在不同外界因素影响下对淡色库蚊幼虫的杀灭活性,为应用持效Bti工程菌杀蚊提供实验依据.方法 在营养肉汤培养基中,将苏云金杆菌野生株Bt-59和cwlE突变株[Bt-59(ΔcwlE)株]培养24 h、将sigK突变株[Bt-59(ΔsigK)株]及cwlE和sigK双突变株[Bt-59(ΔcwlE-sigK)株]培养48h后,各取5μL培养液分别置于载玻片上,光学显微镜下观察细胞形态及母细胞裂解情况.通过测定不同培养时间菌株培养液的光密度,绘制Bt-59、Bt-59(ΔcwlE)、Bt-59(ΔsigK)和Bt-59(ΔcwlE-sigK)株生长曲线.利用Biolog微平板培养技术分析4种菌株碳源代谢差异,计算平均颜色变化率(average well color de-velopment,AWCD)以评价其代谢活性.将以上4种菌株发酵液经梯度稀释至终浓度分别为2.000、1.000、0.500、0.250、0.125 μL/L,以3龄淡色库蚊幼虫作为供试蚊虫,测定菌株的24h致死中浓度(median lethal concentration,LC50).分别取菌株发酵液进行如下处理:调节pH值至5、7和9,置于30、40、50℃下处理12 h,经紫外灯照射0、6 h,随后分别取终浓度为1 μL/L的上述菌株发酵液至200 mL水中,加入20只3龄淡色库蚊幼虫,并置于26℃恒温培养箱中,24 h后计算蚊虫死亡率以评价pH值、温度以及紫外线照射对上述4种菌株杀灭淡色库蚊幼虫效果的影响.结果 Bt-59及其突变株生长曲线变化趋势基本一致,均在培养6h后进入稳定期.Bt-59和Bt-59(ΔcwlE)株细胞内均含有芽胞和晶体蛋白;Bt-59(ΔsigK)和Bt-59(ΔcwlE-sigK)株不产芽胞,细胞内只有晶体蛋白,其中Bt-59(ΔcwlE-sigK)株细胞壁不发生裂解,形成的晶体蛋白包埋在母细胞中.4种菌株的AWCD值随时间变化趋势基本一致,均能代谢糊精、D-麦芽糖、D-海藻糖等33种碳源.Bt-59、Bt-59(ΔcwlE)、Bt-59(ΔsigK)和Bt-59(ΔcwlE-sigK)株发酵液对淡色库蚊幼虫的24 h LC50值分别为0.60、0.51、0.70 μL/L和0.72 μL/L.与pH=7条件下相比,在pH=5条件下,经Bt-59、Bt-59(ΔcwlE)、Bt-59(ΔsigK)和Bt-59(ΔcwlE-sigK)株发酵液处理后的淡色库蚊幼虫校正死亡率分别降低了76.60%、76.00%、66.67%、0;与紫外线照射0h相比,经紫外线照射6h后,经Bt-59、Bt-59(ΔcwlE)、Bt-59(ΔsigK)和Bt-59(ΔcwlE-sigK)株发酵液处理后淡色库蚊幼虫校正死亡率分别降低了49.02%、51.06%、36.36%和4.44%;在不同温度下,经4种菌株发酵液处理后的淡色库蚊幼虫校正死亡率在68.33%～83.33%.结论 Bt-59(ΔcwlE-sigK)株不产芽胞,且cwlE和sigK缺失不影响Bti生长、碳源代谢和杀灭淡色库蚊幼虫效果.Bt-59(ΔcwlE-sigK)株细胞壁包埋可保护Bti杀虫晶体蛋白免受紫外线照射、pH值改变等外界环境因素的影响.